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基孔肯雅熱IgG檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：基孔肯雅熱IgG檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

試劑盒可用于人血清和血漿（檸檬酸鹽）中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測(cè)。

【檢測(cè)原理】

試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預(yù)包被有抗人IgG，用于結(jié)合樣品中相應(yīng)的抗體。洗板后，去除非結(jié)合的樣品。再加入基孔肯雅熱抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的基孔肯雅熱抗體。加入鏈霉親和素標(biāo)記結(jié)合物（酶聯(lián)物），與固相的特異性的基孔肯雅熱復(fù)合物結(jié)合。加入TMB底物液后，微孔中顯藍(lán)色。顯色的強(qiáng)度與病人樣品中基孔肯雅熱IgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應(yīng)，形成黃色終點(diǎn)產(chǎn)物。后在酶標(biāo)儀處450 nm讀數(shù)。

【檢測(cè)方法】

試劑準(zhǔn)備

試驗(yàn)前，將所有試劑，樣品，質(zhì)控品平衡至室溫(20~25℃)

基孔肯雅熱抗原：

每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解，緩慢加入，室溫下靜置溫育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩(wěn)定保存1天。

洗滌液：

1個(gè)單位的濃縮洗滌液+19個(gè)單位的雙蒸水。

如：10mL濃縮洗滌液+190 mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩(wěn)定保存5天。開瓶后，濃縮的洗滌液在2~8℃可穩(wěn)定保存至有效期.

檢測(cè)步驟

試驗(yàn)前，仔細(xì)閱讀說明書。嚴(yán)格執(zhí)行說明書要求才能得到優(yōu)質(zhì)結(jié)果。如試驗(yàn)使用自動(dòng)洗板機(jī)，建議每孔350µL，洗板5次（如手工洗，則每孔300µL，洗板3次）。試驗(yàn)前，確定好樣品，質(zhì)控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。

至少設(shè)

1孔（如A1）         空白對(duì)照

1孔 (如B1)          陰性質(zhì)控

2孔 (如C1+D1）      臨界質(zhì)控

1孔（如E1）         陽性質(zhì)控

如覺得有必要，建議樣品和質(zhì)控品都作雙份檢測(cè)。

試驗(yàn)應(yīng)按同樣的加樣順序加取試劑，避免不同的時(shí)間間隔造成誤差。

使用新的一次性加樣槍頭，加各質(zhì)控品，樣品

調(diào)節(jié)恒溫箱為37±1℃

• 加50µL質(zhì)控品和稀釋樣品至相應(yīng)各孔中，設(shè)A1作為空白對(duì)照
• 封板紙蓋板
• 37 ± 1 ℃溫育1小時(shí)±5分鐘
• 溫育后，移除封板紙，倒出微孔內(nèi)液體，每孔用300µL稀釋洗滌液，洗板3次，避免洗滌液相互溢濺至其它微孔。每次洗板時(shí)，浸泡時(shí)間應(yīng)大于5秒。后，在吸水紙上拍干，去除殘留液滴。

注意：洗滌步驟很關(guān)鍵。不充分的洗板，會(huì)導(dǎo)致不精確或錯(cuò)誤上升的吸光度值。

• 除空白對(duì)照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅熱液抗原液至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復(fù)步驟4
• 除空白對(duì)照孔（A1）外，加50µL 基孔肯雅熱液抗體液至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復(fù)步驟4
• 除空白對(duì)照孔（A1）外，各加50µL鏈酶親和素酶聯(lián)物至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復(fù)步驟4
• 加100 µL TMB底物液至各孔中
• 黑暗處，精確溫育15分鐘
• 按加TMB底物液的順序和速度，加100 µL終止液至各孔中。

藍(lán)色溶液在孵育過程中變?yōu)辄S色。

注意：強(qiáng)陽性樣品會(huì)導(dǎo)致色原產(chǎn)生沉淀，沉淀的產(chǎn)生會(huì)對(duì)讀數(shù)產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質(zhì)進(jìn)行預(yù)稀釋，建議1：1的比例稀釋，然后，再1個(gè)單位的預(yù)稀釋樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液。終結(jié)果（以U計(jì)算）乘以預(yù)稀釋因子2即可

• 加入終止液后，30分鐘內(nèi)，在酶標(biāo)儀450/620 nm處讀數(shù)

【結(jié)果計(jì)算】

用A1空白對(duì)照孔對(duì)酶標(biāo)儀進(jìn)行調(diào)零

如遇技術(shù)問題，酶標(biāo)儀不能調(diào)零。 所測(cè)樣品的吸光度值減去空白對(duì)照的讀數(shù)值，

即可得到可靠的讀數(shù)。

在酶標(biāo)儀處450 nm處測(cè)讀所有質(zhì)控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長(zhǎng)。

如進(jìn)行雙孔檢測(cè)，計(jì)算吸光度均值。

實(shí)驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)

如試驗(yàn)有效，必須滿足以下要求

·空白對(duì)照（A1）：       吸光度值<  0.100

·陰性質(zhì)控（B1）：       吸光度值<  臨界讀數(shù)

·臨界質(zhì)控（C1+D1）     吸光度值   0.150~1.300

·陽性質(zhì)控（E1）        吸光度值>  臨界讀數(shù)

如上述標(biāo)準(zhǔn)沒滿足，試驗(yàn)視為無效，試驗(yàn)應(yīng)重測(cè)。

結(jié)果計(jì)算

臨界讀數(shù)是雙孔臨界質(zhì)控的吸光度均值

示范： 臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值＝0.38

德國IBL基孔肯雅熱IgG檢測(cè)試劑（酶聯(lián)法)